無菌接種步驟
1.將初步洗滌及切割的材料放入燒杯,帶入超凈臺上,用消毒劑滅菌,再用無菌水沖洗,然后瀝去水分,取出放置在滅過菌的紗布上或濾紙上。
2.材料吸干后,一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀,對材料進行適當的切割。如葉片切成0.5cm平方的小塊;莖切成含有一個節的小段。微莖尖要剝成只含1~2片幼葉的莖尖大小等。在接種過程中要經常灼燒接種器械,防止交叉污染。
3.用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養基上。具體操作過程(以試管為例)是:先解開包口紙,將試管幾乎水平拿著,使試管口靠近酒精燈火焰,并將管口在火焰上方轉動,使管口里外灼燒數秒鐘。若用棉塞蓋口,可先在管口外面灼燒,去掉棉塞,再燒管口里面。然后用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內,輕輕插入培養基上。若是葉片直接附在培養基上,以放1~3塊為宜。至于材料放置方法除莖尖、莖段要正放外,其他尚無統一要求。接種完后,將管口在火焰上再灼燒數秒種。并用棉塞,塞好后,包上包口紙,包口紙里面也要過火。