詳細介紹
本研究通過組織培養，對葉下珠進行芽的誘導、增殖、生根和煉苗移栽等，建立了一套完整的葉下珠組培快繁體系，為葉下珠大規模繁殖提供技術參考。
1 材料與方法
1.1 材料
福建省廈門市福建省亞熱帶植物研究所內種植的葉下珠Phyllanthus urinaria。
1.2 方法
1.2.1 培養條件 基本培養基為 MS，瓊脂 7.5 g·L-1，蔗糖為 30 g·L-1，pH 5.8～6.0。培養溫度(25 ± 1) ℃，光照時間12 h·d -1，光照強度1000～1500 lx。
1.2.2 外植體接種 選取長勢均勻的葉下珠植株，用剪刀剪取位于植株中部的莖段，去除葉片與假葉柄。加1～2滴洗潔精將莖段表面洗刷干凈，流水沖洗5～6 h。于超凈工作臺上用75%酒精浸泡30 s，然后用0.1%升汞消毒13 min，無菌水沖洗5～6次，并用無菌濾紙擦干，置于接種盤上。用手術刀將外植體切成1.5～2 cm帶節莖段，生物學頂端朝上接種于培養基上。
1.2.3 生長調節劑配比試驗 將消毒外植體接種到按單因素多水平設計的不同生長調節劑配比的、添加0.5 g·L-1活性炭的MS培養基中，共計7組，分別為：IBA為0.2 mg·L-1，6-BA分別為1.0、1.5、2.0、3.0 mg·L-1;6-BA 為 1.5 mg·L-1，IBA 分別為 0.1、0.2、0.5、1.0 mg·L-1 (表 1)。每組 15 瓶，每瓶接 1個外植體，每3 d觀察1次，15 d統計誘導情況。
1.2.4 誘導培養基 得出芽誘導佳生長調節劑配方后，對比添加0.5 g·L-1活性炭的MS和1/2MS培養基的誘導效果，共2組，每組24瓶，每瓶接1個外植體，每4 d觀察1次，20 d后統計誘導情況。
1.2.5 不同濃度6-BA對葉下珠芽的處理 將莖段誘導出的芽在超凈工作臺上切成1.5～2 cm帶芽莖段，接種至添加不同濃度6-BA的培養基中，共計3組，每處理5瓶，每瓶2個，即每處理10個外植體，每5 d觀察1次，25 d后統計芽增殖情況。
1.2.6 不同濃度NAA與IBA對叢生芽的處理 將增殖擴繁的叢生芽在超凈工作臺上分成單個芽，接種至添加蔗糖20 g·L-1的不同培養基中，共計6組，每處理5瓶，每瓶10個芽，即每處理50個芽，每5 d觀察1次，25 d后統計生根、長勢情況。
1.2.7 煉苗 將生根的瓶苗轉移至培養室外進行煉苗，處理時間設置見表5。煉苗后清水洗凈根部培養基，移栽至加水拌成泥狀的菜園土基質。栽培條件：自然光，氣溫25～30 ℃。移栽15 d后統計成活率。
2 結果與分析
2.1 不同生長調節劑配比對葉下珠芽誘導的影響
從表1可知，不同濃度生長調節劑配比對葉下珠莖段誘導芽的影響效果不同。當IBA為0.2 mg·L-1時，誘導率先是隨6-BA濃度升高而升高，當6-BA濃度達2.0 mg·L-1后，呈現出隨6-BA濃度升高而降低的趨勢。當6-BA為1.5 mg·L-1時，誘導率隨IBA濃度升高呈降低的趨勢。當6-BA為2.0 mg·L-1，IBA 為 0.2 mg·L-1時，誘導率高，達到81.82%，芽的平均長度長，達到1.00 cm，故該配比可作為適宜的葉下珠莖節誘導芽生長調節劑配比。
表1 生長調節劑對葉下珠芽誘導的影響
2.2 不同培養基對葉下珠芽誘導的影響
從表2可知，當生長調節劑配方同為6-BA 2.0 mg·L-1，IBA 0.2 mg·L-1時，1/2MS 培養基比MS培養基的誘導率高，達100%，平均芽長也較長，達2.46 cm。因此，較適合葉下珠莖段誘導芽的培養基配方為 1/2MS +6-BA 2.0 mg·L-1 + IBA 0.2 mg·L-1 + 瓊脂7.5 g·L-1 + 蔗糖 30 g·L-1 + 活性炭 0.5 g·L-1。
表2 不同培養基對葉下珠莖段誘芽的影響
2.3 不同濃度6-BA對葉下珠芽增殖的影響
從表3可知，在相同IBA濃度下，6-BA濃度為1.0 mg·L-1時，芽平均增殖倍數達3.8，為本試驗大增殖倍數，小芽長勢也較好，可為后期研究提供良好的材料。因此，在本試驗中適合芽增殖的培養基配方為 1/2MS + 6-BA 1.0 mg·L-1+ IBA 0.2 mg·L-1 + 瓊脂7.5 g·L-1 + 蔗糖 30 g·L-1。
注：基本培養基為1/2MS。
2.4 不同濃度NAA與IBA對叢生芽生根的影響
從表4可知，NAA對葉下珠叢生芽生長、生根作用不佳。添加NAA后，植株瘦小，莖下部長滿紅色愈傷組織，根呈白色絨毛狀。IBA對葉下珠叢生芽生長、生根有明顯促進作用，在IBA為0.5 mg·L-1時，叢生芽生長快，植株綠色，較粗壯、健康，根系發達，主次根明顯(圖1)。但隨IBA濃度增加，叢生芽植株生長變緩，主次根區別不明顯。因此，較適合叢生芽生根的培養基為1/2MS + IBA 0.5 mg·L-1+ 瓊脂7.5 g·L-1 + 蔗糖20 g·L-1，此時叢生芽生長快，根系發達，生根率達100.00%。
表4 不同濃度NAA與IBA對葉下珠叢生芽生根的影響
注：基本培養基為1/2MS;“-”表示差，“+”表示一般，“++”表示好，“+++”表示較好，“++++”表示好。
圖1 添加IBA 0.5 mg·L-1的誘導苗長勢及生根(25 d)
2.5 不同煉苗時間對葉下珠瓶苗移栽的影響
從表5可見，不經煉苗直接移栽，成活率為60.00%，經過適當煉苗可提高移栽的成活率;煉苗時間不宜太長，若開蓋太長，瓶苗內的培養基長菌，對瓶苗造成傷害;若整體煉苗時間太長，瓶苗自身易失水，不利于移栽，導致成活率低。因此，較適合葉下珠組培苗的煉苗方式為室外閉蓋煉苗 2 d，開蓋煉苗3 d，移栽成活率達86.67%。
表5 不同煉苗時間對移栽成活率的影響
3 討論
葉下珠的主要藥理活性成分柯里拉京是一種多酚類物質，極容易氧化。在外植體誘導叢生芽的過程中，莖節的切口會分泌大量次生代謝產物，導致外植體褐化，降低組培成功率。外植體褐化程度高，需通過多次轉接以避免褐化，但是多次轉接易造成污染。本試驗通過添加活性炭以吸收次生代謝物，抑制褐化效果良好，也減少人為操作帶來的污染。
在芽增殖試驗中，1.0 mg·L-1 6-BA 和0.2 mg·L-1 IBA的生長調節劑組合是較適合芽增殖的生長調節劑配比，這與研究結果相近，但他們認為芽增殖中6-BA佳濃度為2.0 mg·L-1。本研究中6-BA濃度為1.0、1.5、2.0 mg·L-1的芽增殖系數均達3倍以上，并以1.0 mg·L-1時增殖倍數大，小芽長勢好。
在煉苗移栽研究中，基質為泥狀菜園土。泥狀土在栽培初期水分飽滿，但后期易結塊，對組培苗成活率造成一定影響。可適當添加一定比例的有機土進行改良，調整土壤疏松度，以利于移栽苗成活。【本文章內容來源于網絡，如有侵權請告知！我們立即刪除】
