外植體采集與消毒
4月中旬,選擇生長健壯、無病蟲害植物的半木質去葉新梢作為外植體。將新梢剪成1 cm-2 cm的帶腋芽莖段,按下列程序消毒:自來水下沖洗20 min,之后轉移至超凈工作臺上,先用75%的乙醇消毒30 s,再用1%的次氯酸鈉消毒10 min,無菌水沖洗1遍后,用0.5%的次氯酸 鈉消毒10 min?13 min,最后用無菌水沖洗3?4遍。
培養條件
溫度25°C±2°C,光照強度25卩mol ?m-2 ?s-1,光照時間12 h/d。
啟動培養
將消毒后的外植體接種至啟動培養基:WPM+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L,7 d?10 d外 植體開始萌發,30 d后芽長至2 cm?3 cm時進行增殖培養。
增殖培養
將啟動培養誘導形成的高度為2 cm?3 cm幼芽切下,轉接至增殖培養基:WPM+6-BA 1.5 mg/L?2. 5 mg/L+NAA 0.05 mg/L?0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6. 5 g/L,增殖周期為30 d。
生根培養
將高度為4 cm?6 cm的無根幼苗進行兩步生根培養:第一步轉入1 /2MS+IBA 5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+ 蔗糖20 g/L+瓊脂6.5 g/L培養基,黑暗培養11 d進行根誘導;第二步轉入MS+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L 培養基,在光照下繼續培養。
煉苗移栽
煉苗
生根培養30 d后,當幼苗基部長岀3?5條長1 cm的新根即可進行煉苗。將生根瓶苗在溫室內放置5 d, 然后半開瓶口 1 d?2 d,是瓶苗逐步適應外界的環境。溫室溫度在20 °C-30 °C,濕度在60%?90%。
基質準備
基質配制
移栽基質選用草炭和珍珠巖的混合基質,二者的體積比為3: 1.
基質消毒
移栽前用50%多菌靈可濕性粉劑500倍液噴勻基質,充分攪拌善用薄.膜密封,堆置7 d后揭開薄膜, 晾24 h即可使用。
移栽
煉苗結束后,取岀培養瓶中的生根組培苗,用清水洗凈根系粘附的培養基,栽入6. 5 cmX6. 5 cm 的營養缽中,擺放在溫室苗床上,并立即澆透水。
移栽后管理
溫、濕度管理
移栽后立即搭小拱棚密閉保濕,保持小苗的生長溫度25 °C±3 °C,相對濕度90%以上。移栽10 d? 15 d后,逐漸揭膜,透氣通風,直至完全適應外界的環境。
光照管理
組培苗移栽后,用遮光率為50%?75%的遮陽網遮陰。小苗長岀新葉后,及時撤去遮陽網。
施肥
當新葉岀現時進行首次施肥,以后每隔2?3周追肥一次,施用N-P2O5-K2O比例為20-20-20的水溶性 平衡肥,稀釋1000?2000倍葉面噴施。
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