構(gòu)樹(shù)別名楮桃,為落葉喬木,高10 - 20m;樹(shù)皮暗灰色;小枝密生柔毛。樹(shù)冠張開(kāi),卵形至廣卵形;樹(shù)皮平滑,淺灰色或灰褐色,不易裂,全株含乳汁。為強(qiáng)陽(yáng)性樹(shù)種,適應(yīng)性特強(qiáng),抗逆性強(qiáng)。
構(gòu)樹(shù)具有速生、適應(yīng)性強(qiáng)、分布廣、易繁殖、熱量高、輪伐期短的特點(diǎn)。其根系淺,側(cè)根分布很廣,生長(zhǎng)快,萌芽力和分蘗力強(qiáng),耐修剪。抗污染性強(qiáng)。在中國(guó)的溫帶、熱帶均有分布,不論平原、丘陵或山地都能生長(zhǎng),其葉是很好的豬飼料,其韌皮纖維是造紙的高級(jí)原料,材質(zhì)潔白,其根和種子均可入藥,樹(shù)液可治皮膚病,經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高。
形態(tài)特征
葉螺旋狀排列,廣卵形至長(zhǎng)橢圓狀卵形,長(zhǎng)6-18cm,寬5-9cm,先端漸尖,基部心形,兩側(cè)常不相等,邊緣具粗鋸齒,不分裂或3-5裂,小樹(shù)之葉常有明顯分裂,表面粗糙,疏生糙毛,背面密被絨毛,基生葉脈三出,側(cè)脈6-7對(duì);葉柄長(zhǎng)2.5-8cm,密被糙毛;托葉大,卵形,狹漸尖,長(zhǎng)1.5-2cm,寬0.8-1cm。
花雌雄異株;雄花序?yàn)槿彳杌ㄐ颍謮眩L(zhǎng)3-8cm,苞片披針形,被毛,花被4裂,裂片三角狀卵形,被毛,雄蕊4,花藥近球形,退化雌蕊小;雌花序球形頭狀,苞片棍棒狀,頂端被毛,花被管狀,頂端與花柱緊貼,子房卵圓形,柱頭線形,被毛。
聚花果直徑1.5-3cm,成熟時(shí)橙紅色,肉質(zhì);瘦果具有等長(zhǎng)的柄,表面有小瘤,龍骨雙層,外果皮殼質(zhì)。花期4-5月,果期6-7月。
生長(zhǎng)習(xí)性
喜光,適應(yīng)性強(qiáng),耐干旱瘠薄,也能生于水邊,多生于石灰?guī)r山地,也能在酸性土及中性土上生長(zhǎng);耐煙塵,抗大氣污染力強(qiáng)。
產(chǎn)地分布
構(gòu)樹(shù)分布于中國(guó)黃河、長(zhǎng)江和珠江流域地區(qū),也見(jiàn)于越南、日本。適應(yīng)性強(qiáng),耐旱、耐瘠。常野生或栽于村莊附近的荒地、田園及溝旁。
構(gòu)樹(shù)的組培體系建立
外植體的選擇
供試材料為生長(zhǎng)健壯、無(wú)病害的構(gòu)樹(shù)葉片。
組培對(duì)比方法
以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,改變激素種類、濃度及添加瓊脂、蔗糖形成不同培養(yǎng)基組合,并于光照時(shí)間為12小時(shí),光照強(qiáng)度為2500 lux,培養(yǎng)溫度為(25±2)℃的條件下對(duì)試驗(yàn)材料進(jìn)行培養(yǎng)。
外植體消毒的對(duì)比
將洗干凈的構(gòu)樹(shù)葉片用75%乙醇溶液浸泡30秒,經(jīng)無(wú)菌水沖洗2~3次,置于滅菌液中滅菌,并設(shè)置空白對(duì)照。
滅菌液分別為9% Ca(ClO)2,0.5%升汞和10%雙氧水,滅菌時(shí)間分別設(shè)定為5,10,15分鐘。滅菌完成后記錄葉片的死亡率,并用無(wú)菌水沖洗4~10次,瀝干水后迅速將葉片接種到培養(yǎng)基中,每瓶接種3~4個(gè),10瓶為一組,共接種9組,光照培養(yǎng)室中培養(yǎng)7天后統(tǒng)計(jì)葉片的污染率和成活率。
愈傷組織及芽苗的誘導(dǎo)的對(duì)比
以MS+0.8%瓊脂+3%蔗糖為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加入不同質(zhì)量濃度的6-BA和NAA,6-BA采用0.5,1.0,1,5mg/L等3個(gè)水平。NAA采用0.5,1.0,1,5mg/L等3個(gè)水平.將葉片切成1平方厘米左右的正方形,接入培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。每個(gè)水平接種20瓶,每3塊葉片,培養(yǎng)20天后觀察并記錄愈傷組織及芽苗的生長(zhǎng)情況。
壯苗培養(yǎng)基的篩選對(duì)比
以MS+0.8%瓊脂+3%蔗糖為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加入不同質(zhì)量濃度的6-BA和NAA。6-BA和設(shè)置1.0,1,5,2.0 mg/L等3個(gè)水平,NAA設(shè)置0.10,0.15,0.20 mg/L等3個(gè)水平。選擇長(zhǎng)勢(shì)較好的基礎(chǔ)苗進(jìn)行壯苗,每個(gè)水平做15瓶,每瓶1~2株。接種后置于光照培養(yǎng)室中,20 天后觀察并記錄壯苗結(jié)果。
構(gòu)樹(shù)生根培養(yǎng)基的篩選對(duì)比
以1/2 MS+0.8%瓊脂+3%蔗糖為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加入不同質(zhì)量濃度的6-BA和NAA。采用6-BA采用0.5,1.0,1,5mg/L等3個(gè)水平。NAA采用0.2,0.3,0.4,0,5 mg/L等4個(gè)水平。每瓶接種1~2個(gè)幼苗,每個(gè)水平接種15瓶,培養(yǎng)15 天后觀察并記錄構(gòu)樹(shù)健壯幼苗的生根情況。
構(gòu)樹(shù)的馴化移栽
將長(zhǎng)有構(gòu)樹(shù)幼苗的培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至半遮陰的自然光下,2~3天后開(kāi)口煉苗。將營(yíng)養(yǎng)缽中裝入蛭石和珍珠巖,洗干凈幼苗根部黏附的培養(yǎng)基后,將幼苗移入營(yíng)養(yǎng)缽中并澆足水。用塑料薄膜為幼苗搭建小拱棚并噴霧保濕,同時(shí)注意通風(fēng),隨后逐漸降低濕度,15 天后揭去棚膜,讓幼苗在自然條件下生長(zhǎng)。
結(jié)果與分析
消毒劑及消毒方法的比較
滅菌效果很好的處理是75%乙醇溶液浸泡30 秒后,再用0.5%HgCl2滅菌15 分鐘 ,除菌率可以達(dá)到68.2%,外植體的成活率可達(dá)43.6%。
愈傷組織及芽苗的培養(yǎng)基對(duì)比
構(gòu)樹(shù)葉片在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天后,觀察不同濃度激素比例下葉片的增殖倍數(shù)與芽苗高度等生長(zhǎng)狀況。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,對(duì)愈傷組織的影響較大的激素為6-BA,當(dāng)20天質(zhì)量濃度逐漸增大時(shí),芽的增殖倍數(shù)逐漸變大;當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為1.5 mg/L,NAA質(zhì)量濃度為1.0mg/L時(shí),增殖倍數(shù)為5.4,愈傷組織分化效果最明顯。
因此,誘導(dǎo)愈傷組織分化的很佳培養(yǎng)基配方為MS+1.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%瓊瓊脂+3%蔗糖。
構(gòu)樹(shù)壯苗培養(yǎng)基的篩選
從試驗(yàn)得知對(duì)壯苗影響較大的激素為6-BA,當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為1.5mg/L,NAA質(zhì)量濃度為0.2 mg/L時(shí),壯苗效果最明顯,此時(shí)株高為3.6 cm。
由此可得壯苗效果很佳的培養(yǎng)基配方為MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.8%瓊脂+3%蔗糖。
生根培養(yǎng)基的篩選
接種至生根培養(yǎng)基12 天后可以看到根原基分化出的愈傷組織,15天后可看到誘導(dǎo)出的細(xì)小不定根。從試驗(yàn)看出,當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為0.5mg/L,NAA質(zhì)量濃度為1.0 mg/L時(shí),根的生長(zhǎng)情況很好,此時(shí)根原基的發(fā)生率為93%。
由此得出很佳的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%瓊脂+3%蔗糖。
構(gòu)樹(shù)幼苗的馴化移栽
從試驗(yàn)對(duì)比得知,構(gòu)樹(shù)幼苗在移栽到蛭石中的成活率高于珍珠巖。在珍珠巖中,葉片失水嚴(yán)重,苗木萎蔫,生長(zhǎng)不良;而蛭石中的幼苗則生長(zhǎng)良好,移栽25 天后,長(zhǎng)高3~5cm,葉片明顯變大且長(zhǎng)出1~2條新根,原來(lái)的根伸,1~2 cm。
試驗(yàn)結(jié)論
無(wú)菌材料是植物組培快繁的前提,對(duì)葉片進(jìn)行消毒時(shí),時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)對(duì)材料造成毒害,影響葉片的生命活力;時(shí)間過(guò)短可能會(huì)造成消毒不徹底。
由試驗(yàn)得出:很佳滅菌方法為0.5% HgCl2的處理15分鐘,在考慮選擇何種滅菌劑的同時(shí),還綜合考慮了滅菌時(shí)間對(duì)滅菌效果的影響。但也有研究認(rèn)為,構(gòu)樹(shù)葉片外植體很佳消毒方法是0.1% 的HgCl2(加吐溫80和0.5%次氯酸鈉的二次滅菌法,這可能是由于試驗(yàn)材料的來(lái)源不同及其生長(zhǎng)環(huán)境的差異,導(dǎo)致材料所帶的微生物不同,從而需要滅菌的強(qiáng)度也有所差異。
在組織培養(yǎng)中,生長(zhǎng)素類物質(zhì)的主要作用是促進(jìn)新梢生長(zhǎng),誘導(dǎo)外植體產(chǎn)生愈傷組織及促進(jìn)培養(yǎng)組織的延伸生長(zhǎng);細(xì)胞分裂素類物質(zhì)的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞的分裂和分化,誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成。在離體條件下,器官的誘導(dǎo)并不是由某種生長(zhǎng)激素的濃度所決定,而是由那些參與分化的物質(zhì)間的比例關(guān)系所決定,當(dāng)6-BA與NAA的比例低時(shí)有利于愈傷組織的形成和芽的生長(zhǎng);比例高時(shí)有利于芽的分化。
試驗(yàn)研究結(jié)果表明,誘導(dǎo)愈傷組織分化時(shí)6-BA與NAA的適宜比例為3:2;壯苗時(shí)6-BA與NAA的適宜比例15:2;生根時(shí)6-BA與NAA的適宜比例為1:2。
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