1 材料與方法
1.1 材料
艾葉和蒼術購于杭州華東中藥飲片有限公司;乙醇、甲醛、高錳酸鉀、過氧乙酸為分析純試劑;采用金線蓮組培的繼代培養基進行菌類培養。
1.2 方法
1.2.1 處理設計
設置3個艾葉用量梯度1.0，2.0，4.0 g.m-3和3個蒼術用量梯度1.0，1.5，2.0 g.m-3，分別測定組培室空氣的含菌數，獲取艾葉和蒼術的優化用量。比較艾葉和蒼術聯合熏蒸法與甲醛高錳酸鉀熏蒸法、過氧乙酸熏蒸法的滅菌效果。
1.2.2 熏蒸滅菌方法
艾葉熏蒸方法。艾葉經干燥后直接點燃熏蒸。
蒼術熏蒸方法。用95%乙醇浸泡24 h，用時以乙醇為助然劑點燃熏蒸。
甲醛高錳酸鉀熏蒸方法。甲醛2.0 m L.m-3+高錳酸鉀1.0 g.m-3熏蒸。注意將甲醛溶液倒入盛裝高錳酸鉀的容器后，人員立即撤離。
過氧乙酸熏蒸方法。20%過氧乙酸3.0 m L. m-3液置于耐熱容器中，電爐加熱熏蒸。
1.2.3 菌類檢測與統計
采用自然沉降法測定菌類數量。打開培養皿蓋暴露15 min，分別在熏蒸前、后 (熏蒸后3 d)各采樣1次，在室溫下培養2 d，然后按霉菌、細菌進行菌落數分類統計。分別在組培室的四周(距墻50 cm左右)和中間兩處共6個點進行采樣。根據奧氏公式計算組培室空氣的含菌數(m-3)，再計算得出滅菌率，分析各方法的滅菌效果。
空氣菌落總數/m-3=50 000 N/A×T。
式中：A為培養皿面積 (cm2)，T為培養皿暴露時間 (min)，N為培養皿平均菌落數。
2 結果與分析
2.1 艾葉熏蒸的滅菌效果
在不同艾葉用量梯度下，金線蓮組培室空氣滅菌效果存在差異 (表1)。
表1 艾葉不同用量熏蒸處理的滅菌效果
由表1可知，艾葉用量為4.0 g.m-3時，滅菌率高，為60.8%～68.4%;用量為1.0 g.m-3時，滅菌率低，為43.2%～63.9%。結果顯示，艾葉對霉菌的滅殺效果優于細菌。隨著艾葉用量的增加，兩者間的差異降低。艾葉用量為1.0 g.m-3時，對霉菌的滅殺率與對細菌的滅殺率間的差異大，為20.7百分點。因此艾葉用量2.0 g.m-3進行熏蒸是工廠化生產較優且經濟的選擇。
2.2 蒼術熏蒸的滅菌效果
在不同蒼術用量梯度下，金線蓮組培室空氣滅菌效果存在差異 (表2)。
表2 蒼術不同用量熏蒸處理的滅菌效果
由表2可知，蒼術用量在1.0，1.5和2.0 g. m-3時，金線蓮組培室空氣滅菌效果存在差異。蒼術對細菌的滅殺效果優于霉菌。隨著蒼術用量的增加，兩者間差異降低。蒼術用量為1.0 g.m-3時，對細菌的滅殺率與對霉菌的滅殺率間的差異大。用量為1.5 g.m-3時，滅菌率高。因此采用蒼術用量1.5 g.m-3進行熏蒸是較優的選擇。
2.3 不同熏蒸方法滅菌效果比較
由表3可知，1.0 g.m-3高錳酸鉀和2.0 mL. m-3甲醛熏蒸法總滅菌率為71.5%，滅菌后含菌量<90 m-3，2.0 g.m-3艾葉+1.5 g.m-3蒼術聯合熏蒸的總滅菌率為65.4%，滅菌后含菌量<90 m-3，滅菌效果均達到組培對空氣質量的要求;3.0 m L. m-3過氧乙酸熏蒸總滅菌率為67.0%，滅菌后含菌量為103 m-3。前者滅菌效果好，后兩者滅菌效果差異不大，但甲醛高錳酸鉀與過氧乙酸對人體傷害極大，要慎用;而蒼術與艾葉聯合熏蒸法，對人體幾乎無害，且2種藥材來源廣泛，價格便宜，是一種理想的空氣滅菌替代品。
表3 不同熏蒸處理的滅菌效果
2.4 艾葉和蒼術聯合熏蒸法在金線蓮組培苗工廠化生產中的應用效果
在金線蓮組培苗工廠化生產中，連續3年應用艾葉與蒼術聯合熏蒸法對組培室進行滅菌，取得較明顯的效果。
由表4可知，與2010年相比，2012年金線蓮組培苗細菌污染下降率為1.5百分點，霉菌污染下降率為1.6百分點。艾葉與蒼術聯合熏蒸法對金線蓮組培生產空氣滅菌效果較佳，適用于金線蓮組培苗工廠化生產。
表4 艾葉與蒼術聯合熏蒸后的金線蓮組培污染率
3 小結與討論
艾葉、蒼術是常用中藥材，其資源豐富，價格低廉，用于熏蒸滅菌時，操作簡單易行且持續時間長久，已在醫院的手術室、母嬰產房、輸液室以及發熱門診等滅菌中得以應用，但在組培室空氣滅菌中應用較少報道。艾葉、蒼術熏蒸能有效地滅殺或抑制細菌和真菌，本試驗結果表明艾葉用量為2.0 g.m-3時的滅菌率為59.4%～69.0%，蒼術用量為1.5 g.m-3時的滅菌率為51.4%～59.3%;艾葉對霉菌的滅殺效果比對細菌的好，而蒼術對細菌的滅殺效果則優于對霉菌的效果。艾葉用量2.0 g.m-3和蒼術用量1.5 g.m-3聯合熏蒸法滅菌率達到65.4%;甲醛高錳酸鉀熏蒸法滅菌率為71.5%;過氧乙酸熏蒸法滅菌率為67.0%。連續3年采用艾葉和蒼術聯合熏蒸，金線蓮組培苗的污染率均降低。
目前金線蓮組培室空氣滅菌，常采用甲醛高錳酸鉀、過氧乙酸熏蒸。甲醛能引起慢性中毒，出現黏膜充血、皮膚刺激、過敏性皮炎等癥，高錳酸鉀與過氧乙酸都具有較強的腐蝕性，對皮膚和呼吸道有很大的刺激性，損傷呼吸道黏膜。蒼術與艾葉聯合熏蒸具有較強的殺菌作用，且效果持續時間長，對人體幾乎無傷害，克服了傳統滅菌方法的缺點，具有安全、高效、無毒害副作用的特點，是金線蓮組培生產中一種理想的空氣滅菌替代品。
